|
|
Úloha signální dráhy integrity buněčné stěny při morfogenezi kvasinkových kolonií
Reslová, Gabriela ; Schierová, Michaela (vedoucí práce) ; Seydlová, Gabriela (oponent)
U kvasinky Saccharomyces cerevisiae dochází při stresu na buněčné stěně vyvolaném různými vnějšími vlivy (např. chemickými látkami, oxidativním stresem, osmotickými změnami, změnami v pH či teplotním šokem) ke spuštění signální dráhy integrity buněčné stěny (CWI). Cílem mé práce bylo sledovat vliv CWI dráhy na morfogenezi kvasinkových kolonií. Pomocí kmenů s delecí v genech CWI dráhy odvozených od dvou rodičovských kmenů BR-F-Flo11p-GFP a PORT jsem zjistila, že odlišné genetické pozadí ovlivňuje průběh a aktivaci dráhy. U kmenů odvozených od BR-F-Flo11p-GFP bylo zjištěno, že vliv na vzhled kolonií má pouze delece genu MID2, který kóduje povrchový senzor CWI dráhy. U kmenů odvozených od PORT narušení CWI dráhy vedlo k pomalejšímu vývoji kolonií rostoucích na glycerolovém médiu s 0,05mM selenanem. Největší vliv měla delece genu MTL1, který také kóduje povrchový senzor, který je homologní k Mid2. Potvrdila jsem, že kmeny s delecí genů CWI dráhy mají změněnou citlivost k inhibitorům narušujícím integritu buněčné stěny (Calcofluor white, Congo red, zymolyáza). Pomocí zymolyázového testu jsem ověřila propojení CWI dráhy s HOG dráhou. Klíčová slova: Saccharomyces cerevisiae, poškození buněčné stěny, strukturované kolonie, CWI dráha, inhibitorové testy
|
|
|
Metabolismus fosfolipidů při tvorbě strukturovaných kolonií kvasinek
Pavlíčková, Martina ; Schierová, Michaela (vedoucí práce) ; Heidingsfeld, Olga (oponent)
Kvasinky ve svém přirozeném prostředí tvoří strukturované kolonie. To jim umožňuje lépe se přizpůsobit okolním podmínkám, ale také snáze odolávat různým typům inhibitorů kvasinkové infekce. S morfologií kolonií úzce souvisí metabolismus fosfolipidů. Důležitým genem metabolismu fosfolipidů je INO1, který kóduje inositol-3-fosfátsyntázu. Exprese genu INO1 je regulovaná negativním transkripčním faktorem Opi1p, který ovlivňuje i řadu dalších genů pro enzymy metabolismu fosfolipidů, je nezbytný i pro expresi genu FLO11, jehož produkt Flo11p je esenciální pro tvorbu strukturované kolonie. Hlavním cílem mé práce bylo pozorovat souvislosti mezi morfologií kolonií přírodního kmene Saccharomyces cerevisiae a metabolismem fosfolipidů. Zjistila jsem, že exprese genu INO1 i morfologie kolonií se mění vlivem zdroje uhlíku i působením selenanu či inhibitoru β-oxidace mastných kyselin 2-bromooktanové kyseliny. I když gen INO1 pro buňku není esenciální, jeho delece nebo nadměrná exprese způsobuje změny v metabolismu fosfolipidů a morfologii kolonie. Vlivem selenanu a 2-bromooktanové kyseliny se také mění exprese genu FLO11, což se odráží na strukturovanosti kolonie. Kyselina 2-bromooktanová je proto perspektivním agens proti kvasinkovým infekcím.
|
|
|
Metabolismus fosfolipidů při tvorbě strukturovaných kolonií kvasinek
Pavlíčková, Martina ; Schierová, Michaela (vedoucí práce) ; Heidingsfeld, Olga (oponent)
Kvasinky ve svém přirozeném prostředí tvoří strukturované kolonie. To jim umožňuje lépe se přizpůsobit okolním podmínkám, ale také snáze odolávat různým typům inhibitorů kvasinkové infekce. S morfologií kolonií úzce souvisí metabolismus fosfolipidů. Důležitým genem metabolismu fosfolipidů je INO1, který kóduje inositol-3-fosfátsyntázu. Exprese genu INO1 je regulovaná negativním transkripčním faktorem Opi1p, který ovlivňuje i řadu dalších genů pro enzymy metabolismu fosfolipidů, je nezbytný i pro expresi genu FLO11, jehož produkt Flo11p je esenciální pro tvorbu strukturované kolonie. Hlavním cílem mé práce bylo pozorovat souvislosti mezi morfologií kolonií přírodního kmene Saccharomyces cerevisiae a metabolismem fosfolipidů. Zjistila jsem, že exprese genu INO1 i morfologie kolonií se mění vlivem zdroje uhlíku i působením selenanu či inhibitoru β-oxidace mastných kyselin 2-bromooktanové kyseliny. I když gen INO1 pro buňku není esenciální, jeho delece nebo nadměrná exprese způsobuje změny v metabolismu fosfolipidů a morfologii kolonie. Vlivem selenanu a 2-bromooktanové kyseliny se také mění exprese genu FLO11, což se odráží na strukturovanosti kolonie. Kyselina 2-bromooktanová je proto perspektivním agens proti kvasinkovým infekcím.
|
|
|
The effect of HAc1p on the development of yeast colony
Maršíková, Jana ; Schierová, Michaela (vedoucí práce) ; Pichová, Iva (oponent)
Prírodné kmene kvasiniek Saccharomyces cerevisiae vytvárajú na pevnom médiu štruktúrované kolónie podobné biofilmom, čo im umožňuje dlhodobé prežívanie v nepriaznivých podmienkach prostredia. Molekulárny mechanizmus časopriestorového vývoja kolónií a rezistencie voči nehostinným podmienkam je však stále z veľkej časti neznámy. Hlavným cieľom tejto práce bola analýza vplyvu génu HAC1 na morfológiu kolónií. Proteín Hac1p aktivuje bunkovú odpoveď na prítomnosť nezbalených proteínov (UPR), v rámci ktorej sa aktivuje expresia génov kódujúcich proteíny zahrnuté v sekrečnej dráhe a potláčaní stresu v endoplazmatickom retikule (ER). Vplyv delécie génu HAC1 sa preukázal i za nestresových podmienok a viedol ku radikálnemu zníženiu vrásčitosti kolónií delečných kmeňov odvodených od dvoch prírodných kmeňov S. cerevisiae (PORT a BR-F- Flo11p-GFP) a laboratórneho kmeňa ΣSh , ktoré tvoria polovrásčité alebo vrásčité kolónie. Mutantné kmene hac1∆ mali zároveň spomalený vegetatívny rast, znížený charakter vrastania do agaru a zníženú tvorbu zhlukov buniek. U kmeňov hac1∆ odvodených od kmeňa BR-F- Flo11p-GFP bola zistená veľmi nízka hladina povrchového adhezínu Flo11p nevyhnutného pre vytvorenie štruktúrovanej architektúry kvasinkovej kolónie. Je pravdepodobné, že produkcia niektorého proteínu, zúčastňujúceho sa...
|
|
|
Úloha signální dráhy integrity buněčné stěny při morfogenezi kvasinkových kolonií
Reslová, Gabriela ; Schierová, Michaela (vedoucí práce) ; Seydlová, Gabriela (oponent)
U kvasinky Saccharomyces cerevisiae dochází při stresu na buněčné stěně vyvolaném různými vnějšími vlivy (např. chemickými látkami, oxidativním stresem, osmotickými změnami, změnami v pH či teplotním šokem) ke spuštění signální dráhy integrity buněčné stěny (CWI). Cílem mé práce bylo sledovat vliv CWI dráhy na morfogenezi kvasinkových kolonií. Pomocí kmenů s delecí v genech CWI dráhy odvozených od dvou rodičovských kmenů BR-F-Flo11p-GFP a PORT jsem zjistila, že odlišné genetické pozadí ovlivňuje průběh a aktivaci dráhy. U kmenů odvozených od BR-F-Flo11p-GFP bylo zjištěno, že vliv na vzhled kolonií má pouze delece genu MID2, který kóduje povrchový senzor CWI dráhy. U kmenů odvozených od PORT narušení CWI dráhy vedlo k pomalejšímu vývoji kolonií rostoucích na glycerolovém médiu s 0,05mM selenanem. Největší vliv měla delece genu MTL1, který také kóduje povrchový senzor, který je homologní k Mid2. Potvrdila jsem, že kmeny s delecí genů CWI dráhy mají změněnou citlivost k inhibitorům narušujícím integritu buněčné stěny (Calcofluor white, Congo red, zymolyáza). Pomocí zymolyázového testu jsem ověřila propojení CWI dráhy s HOG dráhou. Klíčová slova: Saccharomyces cerevisiae, poškození buněčné stěny, strukturované kolonie, CWI dráha, inhibitorové testy
|
host ::
RSS.